石 金,于永波,张 杰.ATG7对神经母细胞瘤增殖和耐药的影响及机制研究[J].肿瘤学杂志,2018,24(6):562-567.
ATG7对神经母细胞瘤增殖和耐药的影响及机制研究
Effects of ATG7 Gene on Proliferation and Drug Resistance in Neuroblastoma
投稿时间:2017-05-08  
DOI:10.11735/j.issn.1671-170X.2018.06.B007
中文关键词:  ATG7基因  神经母细胞瘤  自噬  细胞增殖  耐药性
英文关键词:ATG7 gene  autophagy  neuroblastoma  cell proliferation  drug resistance
基金项目:国家自然科学基金项目(81472369,31401067,81502144);北京市科技计划(D131100005313014);首都医科大学基础-临床科研合作基金(16JL57);北京市优秀人才培养资助(2015000021469G210, 2015000021469G211)
作者单位
石 金 国家儿童医学研究中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所儿童耳鼻咽喉头颈外科疾病北京市重点实验室 
于永波 国家儿童医学研究中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所儿童耳鼻咽喉头颈外科疾病北京市重点实验室 
张 杰 国家儿童医学研究中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所儿童耳鼻咽喉头颈外科疾病北京市重点实验室 
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中文摘要:
      摘 要:[目的] 研究自噬相关基因ATG7对神经母细胞瘤增殖和化疗耐药性的影响,初步探索其分子机制,为神经母细胞瘤临床治疗提供新的线索和理论依据。[方法] 在神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y和SK-N-BE2中,慢病毒转染敲减ATG7基因,采用MTT染色检测ATG7对细胞增殖能力的影响,同时通过Western blotting方法检测细胞内自噬标志性蛋白LC3表达量来反映细胞内自噬水平;通过检测Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白研究ATG7对细胞凋亡的影响。SH-SY5Y细胞经阿霉素处理后,采用实时无标记细胞分析仪连续监测细胞增殖情况,探讨ATG7在神经母细胞瘤耐药中作用。[结果] 敲减ATG7基因能显著抑制细胞内自噬水平,而且ATG7敲减后细胞在第4、5d的增殖倍数分别为3.05±0.05和3.92±0.08,低于对照组的3.40±0.05和4.35±0.13(P=0.0012,P=0.0085);与对照组相比,ATG7敲减组其凋亡抑制蛋白Bcl-2表达明显降低,促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达显著升高(P<0.05)。经阿霉素处理后,ATG7敲减组细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。[结论] 由于ATG7基因介导细胞自噬过程,ATG7基因在神经母细胞瘤中可能通过自噬作用促进肿瘤细胞异常增殖,抑制细胞凋亡,进而增强细胞耐药性。
英文摘要:
      Abstract:[Objective] To study the effects of autophagy related gene ATG7 on the proliferation and drug resistance in neuroblastoma cells. [Methods] Lentiviral was used to knockdown ATG7 gene and MTT staining was applied to evaluate cell proliferation in human neuroblastoma SH-SY5Y and SK-N-BE2 cells.To confirm the effects of ATG7 in autophagy,autophagy marker LC3 was detected;apoptosis-related proteins(Bcl-2,Bax,Caspase-3) was assessed by Western blotting. In addition,after doxorubicin(25nM) treatment,the proliferation of SH-SY5Y cells were monitored through real-time cell analyzer. [Results] Autophagy was suppressed after ATG7 knockdown in SH-SY5Y cells. The proliferation rates in ATG7 knockdown cells were significantly lower than those in the control group(3.05±0.05 vs. 3.40±0.05,3.92±0.08 vs. 4.35± 0.13,P=0.0012,0.0085) at d4 and d5,respectively. Compared to control group,the expression of Bcl-2 decreased,while the pro-apoptotic protein Bax and Caspase-3 was significantly increased(P<0.05) in ATG7 knockdown group. Moreover,compared with the control group,cell proliferation rate in ATG7 knockdown cells was significantly reduced after doxorubicin treatment. [Conclusion] ATG7 may promote cellular proliferation,suppress apoptosis and enhance drug resistance through autophagy in neuroblatoma.
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